图1.不同基质微球的对比

Q2：说明书上提供了两种实验方案，我该如何选择？

免疫沉淀（IP）主要针对的是纯化单一抗原的实验。抗原-抗体复合物的组合既可以分步进行， 也可以一步完成。下面提供两种常用的孵育方案：

方案一，先将抗体和样品 ( 如细胞裂解物 ) 混合孵育， 然后加入亲和用微球， 结合抗体-抗原复合物。

方案二，先将抗体和亲和微球先进行孵育结合，然后加入含有抗原的样本，依靠亲和微球-抗体复合物来捕获目标抗原。

图2. 两种方案IP操作流程示意图

Q3：我要做Co-IP实验，说明书中只介绍了IP操作的步骤，我应该怎么做？

免疫共沉淀分析（Co-IP）与IP十分相似，实验的方案和基本流程与IP相同，当制备好亲和微球-抗体-抗原复合物后，可以加入待测样品混合孵育，基本上所有IP的体系均可以用于 Co-IP。

Q4：一次实验需要准备多少样品量？

一次实验亲和微球的用量是20ul，能结合的抗体量是5ug左右，细胞裂解液的体积在200-500ul。细胞量的选择及裂解浓度在说明书中有详细介绍。

Q5：酸性洗脱和变性洗脱有什么区别？

酸性洗脱后立即中和，对获得的目的蛋白活性影响较小，除可以用于SDS-PAGE实验，也可用于质谱等分析实验。

变性洗脱获得的蛋白失活，一般只用于SDS-PAGE实验及后续银染或者WB等验证。注：不同洗脱方式获得样品状态见上图2。